PP2Ac去甲基化在锰暴露诱导大鼠肝脏炎症性损伤中的作用研究

摘要

目的:研究亚急性及慢性锰暴露对SD大鼠肝脏的损伤效应,探索PP2Ac去甲基化修饰在锰暴露致肝脏炎症性损伤中的作用。方法:40只雄性SD大鼠按体重随机入组,分别设置4周(4W)和16周(16W)两个暴露时间点,每个时间点分两组(即4W、16W对照组和4W、16W锰暴露组),每组10只;锰暴露组腹腔注射MnCl_(2)·4H_(2)O(15 mg/kg),对照组注射同体积的生理盐水,每天1次,持续4W、16W。实验终点时分离大鼠肝脏,ICP-MS法检测血液及肝组织中锰的含量。苏木精—伊红(HE)染色观察肝脏的病理改变。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测肝脏炎症相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、趋化因子CCL-2的表达。Western blotting法检测肝组织总PP2Ac、去甲基化PP2Ac及PP2Ac甲基化调控蛋白LCMT-1及PME-1的表达。结果:与4 W对照组相比,4 W、16 W锰暴露组全血锰含量显著升高(P<0.01),4 W锰暴露组肝组织锰含量显著下降(P<0.05),而16 W锰暴露组肝组织锰含量显著升高(P<0.01);HE染色结果显示,与4 W对照组相比,4 W锰暴露组出现肝血窦扩张,炎症细胞浸润,16 W锰暴露组与16 W对照组相比,肝索排列紊乱,细胞间隙增大,肝窦进一步扩张充血,大量肝细胞膜破裂;与4 W对照组相比,4 W锰暴露组仅肝脏炎症因子IL-6的表达呈上升趋势,16 W锰暴露组CCL-2、IL-6的mRNA表达与16 W对照组相比呈升高趋势,并且TNF-α的mRNA表达显著升高(P<0.05);4 W、16 W锰暴露组的去甲基化PP2Ac表达水平升高(P<0.05),仅16W锰暴露组的甲基化PP2Ac修饰蛋白LCMT-1表达水平降低(P<0.01),不同时点锰暴露组PME-1、总PP2Ac蛋白表达无明显变化。结论:锰诱导大鼠肝脏产生炎症性损伤,可能与上调肝脏PP2Ac去甲基化有关。