Parkin蛋白对帕金森细胞模型中α-突触核蛋白表达的抑制作用及机制

摘要

目的探讨Parkin蛋白在6-羟基多巴胺(6-OHDA)诱导的帕金森细胞模型中的作用及机制,构建Parkin过表达PC12稳转细胞株。方法通过CCK8法确定6-OHDA对细胞半致死造模浓度;运用qPCR和Westernblot检测细胞株中Parkin mRNA和蛋白水平;在Parkin过表达PC12细胞株和PC12细胞中加入6-OHDA处理24 h,采用CCK8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测线粒体的膜电位水平和细胞活性氧(ROS)水平变化,qPCR和Westernblot检测各组细胞内促凋亡基因Bax、帕金森相关基因α突触核蛋白(α-synuclein)的表达水平。结果6-OHDA的造模浓度为50μmol/L;构建Parkin过表达细胞株;相对于PC12+6-OHDA组,用50μmol/L浓度6-OHDA处理Parkin过表达PC12细胞株,线粒体膜电位水平有显著升高的趋势(P<0.05),ROS水平显著升高(P<0.05),细胞内Bax和α-synuclein的蛋白表达水平明显减少(P<0.01)。结论Parkin蛋白在6-OHDA诱导的帕金森细胞模型中具有保护作用,其机制可能与Parkin蛋白通过抑制线粒体凋亡通路和降低α-synuclein蛋白表达相关。