含LoxP位点和EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体的构建

摘要

提取鸭瘟病毒(DPV)疫苗株基因组DNA为PCR扩增模板.并根据GenBank已发表的DPV UL区UL24、UL23、UL22基因序列.选择保守序列设计了两对引物.分别扩增出位于UL23(TK)两侧的可用于同源重组的左臂片段(L)和右臂片段(R).L包括部分UL24、部分TK,R包括部分TK及部分UL22,L和R的拼接片段中TK基因内部缺失468个核苷酸.将L片段和R片段克隆于pBluescript M13-载体上.获得了pSKLR;再将含2个LoxP位点的表达绿色荧光蛋白的基因表达盒插人pSKLR的L片段和R片段之间构成转移载体pSKLR-EGEP-LoxP.大量提取pSKLR-EGEP-LoxP质粒.用脂质体转染鸭胚成纤维细胞.24 h后蛋白被正确表达.表明含LoxP位点的表达EGFP的鸭瘟病毒TK基因缺失的重组转移载体被成功构建.