基于胃癌MG7-Ag模拟表位基因疫苗的构建

摘要

目的　构建以胃癌 MG7- Ag模拟表位为基础的DNA疫苗 .方法　将 H ind 酶切位点、MG7- Ag模拟表位和通用性辅助性 T细胞 (Th细胞 )表位编码序列的反向互补序列顺次设计于下游引物中 ,通过 2次聚合酶链式反应将 2种表位连接于一段载体基因 ,H ind 酶切位点位于载体片段与表位基因之间 .将目的基因插入 p UCm - T载体 ,酶切鉴定和序列测定证实后 ,利用 p UCm- T载体和 pc DNA3.1(+)载体共有的 Kpn 和 Xba 酶切位点 ,将目的基因亚克隆入真核表达载体 pc DNA3.1(+)载体 .酶切鉴定后 ,利用目的基因和pc DNA3.1(+)载体上的 H ind 酶切位点 ,H ind 酶切去除载体基因片段 ,得到胃癌 MG7- Ag模拟表位和通用性 Th细胞表位的真核表达载体 .结果　经序列测定证实 :PCR产物为载体基因、H ind 酶切位点、MG7- Ag模拟表位及通用性Th细胞表位的融合片段 ;最终得到的重组 pc DNA3.1(+)质粒含有正确编码以上 2种表位的基因片段 .结论　以胃癌MG7- Ag模拟表位为基础的 DNA疫苗构建成功 。