细菌内同源重组高效制备人突变p27基因重组腺病毒

摘要

目的 :利用细菌内同源重组法 ,构建含人突变p2 7(hp2 7mt)基因重组腺病毒 .方法 :hp2 7mt自载体 pORF9 hp2 7mt中切出 ,亚克隆至穿梭质粒 pShuttle CMV中 ,形成转移质粒pShuttle CMV hp2 7mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle CMV hp2 7mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy 1的超感受态BJ5 1 83,使其在细菌内发生同源重组 .重组质粒鉴定正确后经PacI酶切 ,转入Ad2 93细胞 ,包装成重组腺病毒Ad hp2 7mt.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ,用紫外分光光度计进行滴度测定 .结果 :用含pShuttle CMV hp2 7mt转化含pAdeasy 1的超感受态BJ5 1 83后 ,可获得约 30 %的阳性重组质粒 .PCR检测表明重组腺病毒含有目的基因 .滴度为 7.95× 1 0 1 5pfu/L .结论 :用细菌内同源重组法可快速、高效制备均一的高滴度重组腺病毒 .为研究 p2