人p65和IκBα基因真核表达载体的构建及在永生化滑膜细胞中的表达

摘要

目的构建人p65和IκBα基因的真核表达载体并检测其在人永生化滑膜细胞MH7a中的表达.方法应用RT-PCR方法从体外培养的HEK293细胞mRNA中扩增出p65和IκBα基因的编码区,克隆至pMD18T载体并测序,然后亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1myc/His(-)A,酶切鉴定正确后以脂质体法瞬时转染MH7a细胞,WesternBlot检测p65和IκBα的表达.结果测序证实PCR扩增得到的p65和IκBα基因编码区序列正确;脂质体法转染MH7a细胞后检测到预期目的蛋白的表达.结论成功构建了p65和IκBα的真核表达载体并使其在人永生化滑膜细胞中表达.