秦巴山区黑木耳主要栽培种内原生质体分离与融合

摘要

采用单一变量法研究了黑木耳神农A8与秦单4#原生质体的制备、再生及融合的最佳条件.培养7d的黑木耳菌丝体用0.5 mol/L甘露醇做稳渗剂,2.0 mol/L的溶壁酶酶解,30℃下水浴3.5 h时,黑木耳神农A8和秦单4#原生质体释放量分别达到0.94×107、1.44×107个/mL;选择RM5再生培养基,神农A8和秦单4#原生质体再生率最高,分别为1.91％、1.53％;原生质体融合的最佳条件为:使用30％聚乙二醇(PEG4000)和0.05 mol/L CaCl2溶液(pH 10)为助融剂,35℃融合30 min.通过荧光镜检和撷抗反应得到融合子,为黑木耳的遗传育种奠定理论基础.