一株无内源质粒短乳杆菌的电转化条件

摘要

以质粒pMG36e,pNZ8148,pNZ9530和无内源质粒的短乳杆菌(Lactobacillus brevis CGMCC1306)为材料,通过对短乳杆菌感受态制备及电转化过程中各影响因素的考察,建立了最佳的电转化实验条件.结果表明:添加质量分数1％甘氨酸作为细胞壁弱化剂,于MRS培养基中37℃静置培养至对数中期(OD600=0.4～0.6),以0.5 mol/L蔗糖、5 mmol/L KH2P04、0.5 mmol/L MgCl2(pH 7.4)为洗涤剂,以1 mol/L蔗糖、3 mmol/L MgCl2为电击缓冲液制成感受态细胞,加入400 ng的质粒DNA,调节电场强度为10 kV/cm,电击3.5 ms,于含有0.3 mol/L蔗糖的MRS培养基中复苏培养3h,获得最佳转化率.为外源基因电转化短乳杆菌提供了实验依据,也为短乳杆菌遗传改造及基因功能探究奠定了实践基础.