新型冠状病毒核衣壳蛋白抗原的重组表达及其单克隆抗体的制备

摘要

目的 制备新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核衣壳蛋白重组抗原及其单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb).方法 根据公布的新冠病毒全基因组序列,构建其核衣壳蛋白的表达载体pET-28a-N,并转化至Escherichia coli BL21(DE3)进行原核表达,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及Western blot鉴定纯化后的核衣壳蛋白重组抗原的特异性,并免疫Balb/c系小鼠,基于杂交瘤融合技术筛选获得可持续分泌新冠病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的细胞株,并基于ELISA及生物膜层干涉(biofilm layer interference,BLI)技术鉴定单克隆抗体的特异性和亲和力.结果 基于大肠杆菌原核表达获得新冠病毒核衣壳蛋白的重组抗原,其纯度可达90％,筛选获得7株可分泌特异性结合新冠病毒核衣壳蛋白的杂交瘤细胞株,经Western blot、ELISA及分子相互作用分析等方法证实所获得的单克隆抗体与核衣壳蛋白具有优良的结合特异性和结合活性,其中的7E11、7E8单克隆抗体与核衣壳蛋白抗原的亲和力常数分别为1.69×10-9、2.031×10-9 mol/L,可作为抗体元件应用于新冠病毒的快速免疫分析领域.结论 本研究获得高特异性的SARS-CoV-2核衣壳蛋白重组抗原及其单克隆抗体.