唐鱼β-肌动蛋白基因启动子的分离及其驱动活性的检测

摘要

利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthys albonubes)β-actin基因.所克隆的β-actin基因片段为1 464 bp,包含长为1 374 bp的启动调控区和90 bp的部分开放阅读框.启动调控区包括105 bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子.上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAAT Box、TATA Box、CArG Box等元件.将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达.结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较高.PCR检测转基因唐鱼的部分器官组织,在被检组织器官中均能检测到外源RFP基因;而RT-PCR以及Southern blot验证显示RFPmRNA的表达有所不同;Southern blot检测肌肉组织基因组DNA,可见比阳性载体大的杂交条带.说明所检测的组织中已发生外源基因RFP的整合,但有些组织存在表达水平较低或者不表达的现象.本实验分离到的β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能,可启动外源基因在唐鱼体内的高效表达,从而为下一步进行功能基因的转化研究奠定基础.