半滑舌鳎生长激素及其受体基因的原核表达

摘要

根据已克隆的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生长激素(GH)基因和生长激素受体Ⅰ(GHR-Ⅰ)基因的cDNA序列信息设计引物，用于扩增半滑舌鳎 GH、GHR-Ⅰ基因序列.随后，分别利用表达载体 pET-32a 和 pGEX-6P-1成功构建了包含半滑舌鳎 GH、GHR-Ⅰ基因 ORF全序列及不同 ORF片段的6个重组质粒，并将获得的重组质粒在表达宿主菌大肠杆菌(Escherichia coli) BL21(DE3)中，用IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳结果显示：重组GH 的pET-32a-CSGH质粒在40 kD处有特异性的蛋白条带，重组GHR-Ⅰ胞内区的pGEX-6P-1-CSGHR1-2质粒在70 kD处发现诱导的蛋白条带，其表达量分别占细胞蛋白总量的37.6%和20.2%；而构建的pGEX-6P-1-CSGH重组质粒和含有GHR-Ⅰ基因跨膜区的重组质粒(pET-32a-CSGHR1-1、pET-32a-CSGHR1-2和pGEX-6P-1-CSGHR1-1)均未获得表达产物.由此可见，半滑舌鳎GHR-Ⅰ基因的跨膜区可能影响其在大肠杆菌中的表达.研究结果为实现半滑舌鳎GH、GHR-Ⅰ制剂的开发及应用于养殖生产实践奠定基础.%10.3724/SP.J.1118.2012.00956