从K562细胞中提取热休克蛋白GP96及其对人树突状细胞分化和功能的影响

摘要

本研究旨在建立从K562细胞系中提取热休克蛋白GP96的方法,进而研究GP96对人树突状细胞分化和功能的影响.采用蛋白分离提纯技术,将K562细胞裂解,经饱和硫酸铵沉淀、亲和层析、离子交换层析后提纯出热休克蛋白GP96,用SDs-PAGE凝胶电泳和Western blot方法对其进行鉴定.将提纯的GP96加入从正常人外周血单个核细胞诱导培养的树突状细胞(dendritic cell,DC)中,通过流式细胞术检测DC细胞表型变化,用MTT法测定混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR).结果表明:从1×1010K562细胞中能提纯出热休克蛋白GP96 60-80 μg;加入GP96制备的HSP-DC,其细胞表面标志CD83、CD86和HLA-DR的表达率比常规培养DC明显升高,CD1a表达率降低(P＜0.05);HSP-DC比常规培养DC具有更强的刺激混合淋巴细胞反应的能力(P＜0.05).结论:从K562细胞中可以提取出热休克蛋白GP96;热休克蛋白GP96可以促进树突状细胞分化成熟,使其具有更强的刺激同种异体人T淋巴细胞增殖的能力.