小鹅瘟PCR诊断方法的建立和初步应用

摘要

根据发表的鹅细小病毒B株VP3基因序列,设计合成了1对寡聚核苷酸引物.以国内分离的小鹅瘟病毒为摸板,筛选了(PCR)最佳反应条件,并进行了敏感性、特异性和初步应用试验.结果表明,在40 μL体积中,PCR最佳系统组成为2 u Taq酶、0.5 mol/L dNTP和20 pmol引物;最佳反应参数为96℃变性40 s,54℃退火1 min,72℃延伸1 min,30个循环.本方法可检出2.5×10-1.5EID50小鹅瘟病毒,并且仅能从小鹅瘟病毒的鹅胚培养物中扩增出与设计值大小相同的375 bp核苷酸片断,对照病毒扩增结果为阴性.通过对6份临床病料的检查,2份呈阳性,其中1份来自有典型小鹅瘟症状的雏鹅,1份来自无典型小鹅瘟症状的雏鹅.由此说明,本试验所建立的诊断小鹅瘟的PCR方法具有潜在的临床应用价值.