蔗糖转化酶SUC2分泌表达系统的改造

摘要

酿酒酵母水解菊糖的能力与蔗糖转化酶SUC2的分泌表达水平直接相关,而绝大多数酿酒酵母中SUC2的低水平分泌表达限制了菊糖基乙醇工业化生产的进程.通过全基因合成获得α交配因子分泌信号肽编码基因片段αFSP,并利用RF克隆手段将SUC2自身的天然分泌信号肽替换为αFSP.重组菌株BY-mS发酵48 h后的酶活力测定结果表明,全细胞和发酵液上清菊糖酶活力分别为2.6和3.4 U/mL,蔗糖酶活力分别为34.5和9.7 U/mL均高于对照菌株BY-BS.说明相对于SUC2自身的天然分泌信号肽,α交配因子分泌信号肽的融合能够有效地提高SUC2在酿酒酵母中的分泌水平,且从不同分泌场所中的酶活差异可以推测出,SUC2分泌定位于细胞壁表面时的构象更加利于蔗糖酶酶活的展示,而当SUC2分泌至发酵液上清中时,结构的变化导致该酶的菊糖酶活力更高.