中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用

摘要

将分离自中华鳖Trionyxsinensis主要细菌性疾病——肠道出血性败血症、鳖穿孔病(疖疮病)、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株病原菌,在体积分数为3.5%的福尔马林溶液中灭活24 h。在灭活的4株菌中添加不同佐剂,充分混匀后分别制备成总含菌量为6×109个/mL的4价菌苗,分别免疫8只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。经3次免疫后,随机选3只小鼠抽血制备血清,用间接ELISA方法测定抗体效价,除空白对照组外,其它4组小鼠的免疫血清效价为1∶1.6×104～1∶2.56×105,各免疫组的效价依次为弗氏佐剂>白油佐剂>蜂胶佐剂>不加佐剂。另外5只小鼠用于免疫保护性试验。结果表明:3种佐剂的免疫保护率均为100%,而不加佐剂组免疫保护率为80%,空白对照组死亡率为100%。考虑到弗氏佐剂的成本较高且白油佐剂有副作用,故选择蜂胶作为免疫佐剂,制备了中华鳖4价菌苗。用该菌苗免疫接种50只体重为100～150 g/只的健康中华鳖,注射剂量为0.2 mL/只,并设置对照组(注射等量的生理盐水),共接种20只健康中华鳖。分别于免疫后第20、30、40、50天随机采集3只受免疫的中华鳖和对照组的1只中华鳖血液并制备血清,用浙江省淡水水产研究所制备的针对中华鳖IgM的单抗3H3介导的ELISA方法,测定血清中的抗体效价。结果表明:当中华鳖免疫后40 d,血清中抗体效价达到最高,为1∶6.4×104;免疫后50 d将受免中华鳖分成4组,分别用4种菌株以5LD50(9×106个/mL)进行攻毒试验(0.5 mL/只),结果免疫保护率均达到100%,而对照组死亡率均为100%。