流式细胞术产前非侵入性定量检测胎-母出血的研究

摘要

目的建立产前非侵入性定量检测RhD阴性孕妇胎-母出血的流式细胞术实验方法.方法 RhD阴性红细胞与RhD阳性红细胞按一定比例混合,用抗-D作为一抗结合D+红细胞,以羊抗人IgGF(ab′)2-FITC作为二抗,连接抗-D,应用流式细胞术检测D+红细胞占D-红细胞的比例,建立抗-D及抗人IgGF(ab′)2-FITC的量效关系,确定两者最佳使用剂量.在此实验条件下,进行流式细胞术检测值与实际值的相关性分析,判定可以检测出的D-红细胞中混有D+红细胞的准确出血量范围,应用建立的流式细胞术方法测定9例RhD阴性孕妇外周血中的胎-母出血量.结果抗-D的有效使用剂量为1∶400稀释,100 μl/5×106细胞;羊抗人IgGF(ab′)2-FITC的有效使用剂量为2.5 μg/5×106细胞;流式细胞术测定比例与已知实际比例的相关系数r=0.998;准确检测的胎-母出血量为(0.6～30) ml.9例RhD阴性孕妇外周血中除2例未检出D+细胞而无法判断外,其余7例均检测出胎-母出血,胎-母出血量为(1.2～6.48) ml.结论针对孕期发生胎-母出血反应的RhD阴性孕妇,可以应用流式细胞术方法在产前准确无损伤地定量检测胎-母出血量,指导临床预防、治疗Rh新生儿溶血病.