利用高效siRNA表达载体抑制结肠癌细胞Notch1基因表达的研究

摘要

目的 探讨利用靶向Notch1基因的高效siRNA真核表达载体抑制结肠癌细胞中Notch1表达的可行性.方法 根据Notch1 cDNA编码序列,设计并合成靶向Notch1基因的4对特异性RNA干扰片断,将其克隆入pSilencer4.1-CMV neo载体中.将重组载体及其阴性对照载体转染结肠癌细胞SW480,采用逆转录-多聚酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组细胞中Notch1 mRNA表达水平,筛选获得能够高效抑制结肠癌细胞Notch1表达的siRNA真核表达载体.结果 成功构建了4个靶向Notch1基因的siRNA真核表达载体;转染结肠癌细胞SW480后,与对照组相比各干扰组细胞中Notch1 mRNA表达水平均明显下降,其中尤以psiNotch1-A组下降最为明显.结论 成功筛选出能够在结肠癌细胞中高效抑制Notch1基因表达的特异性siRNA真核表达载体,为进一步利用siRNA靶向Notch1治疗结肠癌奠定了基础.