整合素连接激酶在重组结缔组织生长因子诱导大鼠肝星状细胞表型转化中的作用

摘要

目的 研究整合素连接激酶(ILK)在重组结缔组织生长因子(rCTGF)诱导大鼠原代肝星状细胞(HSC)表型转化中的作用.方法 应用胶原酶原位灌注+密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,细胞贴壁培养24h后以rCTGF处理,24h后转染ILK小干扰RNA(siRNA)或对照siRNA,设rCTGF对照及空白对照.应用RT-PCR及Western Blot检测转染siRNA 24、48及72 h时HSC α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、ILK及Ⅰ型胶原基因表达水平变化.计量资料采用t检验.结果 与空白对照相比,rCTGF处理可显著上调大鼠HSC αSMA、ILK蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达.转染ILK siRNA可特异性抑制以TGF诱导的ILK表达上调,与rCT-GF对照相比,转染ILK siRNA 24、48及72 h时,HSC ILK蛋白表达分别下调72％ ±6％ (t=21.39,P＜0.01)、87％±9％(t=68.25,P＜0.01)及47％±3％(t=18.25,P=0.003);αSMA蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达分别下调5％±1％(t=2.52,P＞0.05)及6％±3％(t=1.63,P＞0.05)、31％±7％(t=34.77,P＜0.01)及20±5％ (t=6.71,P＜0.05)和67％ ±8％(t=58.82,P＜0.01)及43％±6％(t=15.21,P＜0.01);转染对照siRNA时,HSC ILK、αSMA及Ⅰ型胶原mRNA表达在相同时点无显著变化.结论 ILK可能部分介导了以TGF诱导的大鼠HSC表型转化.