miR-4698介导GALNT4表达对肝癌细胞增殖和迁移的影响

摘要

目的检测miR-4698在肝癌组织及细胞系中的相对表达,分析其对肝癌细胞增殖和迁移的影响及分子作用机制。方法采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测肝癌组织和肝癌细胞系中miR-4698的相对表达。在表达最低的肝癌细胞系中,采用脂质体转染法分别转染miR-4698模拟物和对照模拟物,命名为实验组和对照组。qRT-PCR检测转染效率。细胞计数试剂盒（CCK-8）和Transwell迁移实验分别检测过表达miR-4698对肝癌细胞增殖和迁移能力的影响。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因实验预测并验证miR-4698与靶基因的结合。qRT-PCR和Western blot分别检测靶基因在mRNA水平和蛋白水平的相对表达。结果与癌旁组织相比,miR-4698在肝癌组织的表达明显降低（P＆0.01）。与正常肝细胞系相比,miR-4698在肝癌细胞系的表达明显降低（P＆0.05）,在Huh7细胞的表达最低（P＆0.01）。转染后,与对照组相比,实验组Huh7细胞中miR-4698的表达明显增加（P＆0.01）。过表达miR-4698可抑制肝癌Huh7细胞的增殖能力（P＆0.05）和迁移能力（P＆0.05）。生物信息学显示miR-4698的靶基因是多肽-N-乙酰氨基半乳糖转移酶4（GALNT4）,双荧光素酶报告基因证实miR-4698可互补结合GALNT4（P＆0.01）。qRT-PCR结果显示,过表达miR-4698可抑制GALNT4基因的表达（P＆0.01）。Western blot实验显示,miR-4698过表达后,Huh7细胞中GALNT4蛋白表达降低,细胞增殖相关蛋白Cyclin B和CDK1表达降低,细胞转移相关蛋白N-cadherin和ZEB-2表达降低。结论 miR-4698在肝癌组织和细胞系中表达明显下降,过表达miR-4698可通过抑制GALNT4基因的表达,降低肝癌Huh7细胞的增殖和迁移能力。