黄芪甲苷对高糖受损人脐静脉内皮细胞分泌SDF-1α和CXCR4的影响

摘要

目的探讨黄芪甲苷（AS-IV）对高糖受损人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌基质细胞衍生因子-1α（SDF-1α）、CXC趋化生长因子受体4（CXCR4）的影响,为进一步研究AS-IV通过内皮细胞调节SDF-1α/CXCR4轴改善血管新生奠定基础。方法从足月健康新生儿脐静脉中分离、培养出HUVECs,采用血管性假性血友病因子（vWF）联合4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）核染鉴定,将获得的HUVECs用含30 mmol/L葡萄糖的EGM-2培养基培养120 h得到高糖受损HUVECs。用不同浓度梯度（25、50、100、200、400 mg/L）AS-IV干预72 h,经酶联免疫吸附法（ELISA）检测SDF-1α和CXCR4含量,以确定AS-IV的最佳作用浓度。用最佳浓度AS-IV干预受损HUVECs,分别于6、12、24、48、72 h收集细胞上清液,经ELISA法检测SDF-1α和CXCR4含量,以确定AS-IV的最佳作用时间。将高糖受损HUVECs随机分为实验组和对照组,同时设置空白组。实验组用最佳浓度AS-IV和最佳时间干预,对照组和空白组用等容量PBS液处理,用ELISA法检测各组SDF-1α和CXCR4含量。结果胞膜结合vWF因子呈绿色荧光,细胞核DAPI核染后呈蓝色,融合图像显示膜染绿色荧光,核染蓝色荧光,即为HUVECs。100 mg/L的AS-IV作用24 h时,高糖受损HUVECs表达SDF-1α的量达最佳（1 642.87 pg/ml）;50 mg/L的AS-IV作用48 h时,高糖受损HUVECs表达CXCR4的量达最佳（8.44 ng/ml）。与对照组相比,实验组SDF-1α和CXCR4含量明显增多,差异有统计学意义（P＆0.05）;与空白组相比,实验组SDF-1α和CXCR4含量略少,差异无统计学意义（P＆0.05）。结论 AS-IV能促进高糖受损HUVECs表达SDF-1α和CXCR4,使其恢复正常生理水平,以发挥修复损伤血管和血管新生作用。