葡萄糖胺-6-磷酸合成酶的异源表达及其酶学性质表征

摘要

葡萄糖胺-6-磷酸合成酶(GFA)是己糖胺生物合成中的一个关键酶,为建立一条高效的GFA生产工艺,其研究对象GFA来源于致病菌白色假丝酵母(Candida albicans ATCC 64548),通过基因克隆,然后在大肠杆菌中进行异源表达.结果显示,GFA的最佳异源表达条件为:诱导剂浓度为0.1 mmol.L-1,诱导温度为28°C,诱导时间为15 h,诱导时机为菌体浓度OD600达到1.0.其最佳的反应条件为:反应温度为37°C,反应pH为7.2,反应时间为20 min.通过双倒数作图法得到该酶的KM值为0.47 mg.mL-1;当反应体系中加入抑制剂(bacilysin)时,GFA转氨酶活性会被显著抑制,酶活降低约54.8％.结果表明,研究所采取的方法能够高效地异源表达葡萄糖胺-6-磷酸合成酶,提高其应用潜力,这对于加快新型抗真菌药物的研发具有重要意义.