Nocardia sp.腈水合酶的纯化过程研究

摘要

对Nocardia sp.高活力腈水合酶进行了纯化研究.在细胞破碎中,超声时间对腈水合酶比酶活存在一个最优值,超声时间为20.00min时得到的比酶活最高.在离子交换层析过程中,采用DEAE-Sepharose作为层析介质,分别对平衡缓冲液pH、离子强度和线性梯度洗脱体积进行了优化.结果表明,采用pH7.20、50mmo1·L-1的Na2HPO4-NaH2PO4溶液作为平衡缓冲液,0.00～1.00mo1·L-1的NaCI线性梯度洗脱,洗脱体积为20～25倍柱体积,此条件下腈水合酶的纯化倍数和酶活收率较佳.以Phenyl-Sepharose FF为层析介质研究了疏水层析精制腈水合酶的工艺过程,采用两步层析优化方法纯化出的Nocardia sp.腈水合酶比酶活达到2648.0 U·mg-1,酶活收率为40.84%,用SDS-PAGE检测其纯度为99 00%以上.Nocardia sp.腈水合酶的两个亚基分子量分别为22.90 kDa和27 38 kDa.