SD大白鼠骨髓多能间质干细胞QY1细胞系的生物稳定性分析

摘要

目的:探索建立Sprague-Dawley大白鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)系体外长期培养的适宜条件及其生物学特性,并分析其稳定性,为进一步研究MSCs的诱导分化和应用提供理想的细胞模型.方法:应用细胞生物学、干细胞组织工程学等方法培养并纯化骨髓MSCs,检测细胞生长的形态、换液时间、生长曲线、倍增时间、贴壁率、染色体、培养条件和反复冻存后复苏对其生物学特性的影响.结果:多次传代后的细胞呈均一的成纤维细胞样;骨髓MSCs原代培养10～12 d时融合至80%～90%,不同的首次换液时间之间差异没有统计学意义(P＞0.05);P1,P3,P10,P20代细胞生长曲线基本相同,细胞的倍增时间P1为34.2 h;P3为33.9 h;P10为31.8 h;P20为30.6 h.4代细胞任意两代之间的细胞数差异没有统计学意义(P＞0.05);传代后细胞迅速贴壁,约89%的细胞贴壁主要发生在接种后10 h内.4代细胞任意两代之间的贴壁率差异没有统计学意义(P＞0.05);在浓度为20%的标准胎牛血清中,骨髓MSCs的增殖活性最高;在种植细胞密度为8×104/mL时,骨髓MSCs的增殖活性最高;吉姆萨染色显示P8代骨髓MSCs胞浆为淡紫红色,胞核为深蓝色,细胞内可见1～2个核仁;P8和P20代细胞染色体形态及数目均正常,染色体核型组成均为42,XY,符合大鼠正常二倍体细胞系特征;反复冻存后复苏骨髓MSCs,其活细胞数＞85%.至今已体外培养10个多月.结论:QY1细胞系是纯的、可长期传代的细胞系,可扩增并保持未分化状态,且其生物学性能稳定.