云南金花茶SSR-PCR反应体系的建立与优化

摘要

以云南金花茶为试验材料,利用试剂盒法、SDS法及CTAB法3种方法提取其DNA,并对3种方法的提取结果进行比较;经初筛合成云南金花茶EST-SSR引物,并对影响SSR-PCR体系的Mg2+、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物及模板DNA这5个因素进行L16(45)正交实验,以期建立较为稳定的云南金花茶SSR-PCR体系.试验结果表明:试剂盒法提取得到的云南金花茶DNA质量最好且符合SSR分子标记试验.各因素对PCR扩增效果的影响程度为:Mg2+>引物>Taq DNA聚合酶>dNTP>模板DNA.试验最终确定的金花茶SSR-PCR最佳反应体系(20μL)为:2.0μL Taq Buffer、1.5μL Mg2+(25 mmol/L)、0.3μL dNTP(10 mmol/L)、0.2μL Taq DNA聚合酶(5 U/μL)、前后引物各0.4μL(10μmol/L)、0.5μL模板DNA(50 ng/μL)、14.7μL ddH2O.建立和优化云南金花茶SSR反应体系,可为云南金花茶不同种群的遗传变异研究提供基础.