不同固定剂对鼻息肉上皮细胞免疫荧光染色的影响

摘要

cqvip:目的通过激光共聚焦技术,观察鼻息肉体外培养上皮细胞在3种不同固定剂作用下的免疫荧光染色效果,探讨不同固定剂对免疫荧光染色结果的影响,从而选择最佳固定方法。方法用酶消化法分离培养鼻息肉上皮细胞,接种培养7 d后,分别用4%(质量分数)多聚甲醛(paraformaldehyde,PFA)、等体积甲醇丙酮混合液及甲醇室温固定,1%(体积分数)Triton X-100透膜,山羊血清封闭,滴加一抗4℃过夜,滴加相应荧光二抗,含DAPI封片剂封片,激光共聚焦显微镜观察。结果等量甲醇丙酮混合液及甲醇对标记的4个标记蛋白均有较好的固定作用;4%(质量分数)PFA对跨膜蛋白16A(transmembrane protein 16A,TMEM16A)固定效果差,对紧密连接蛋白(zonular occludens-1,ZO-1)的固定效果不理想。结论甲醇丙酮混合液及甲醇对标记的4个标记蛋白的固定作用均较好,为体外培养细胞免疫荧光染色最佳固定剂的选择提供参考。