032基因缺失猪痘病毒载体的构建及鉴定

摘要

目的:构建毒力减弱的猪痘病毒载体.方法:以猪痘病毒野生毒株NT1501株为亲本毒株,通过同源重组方法,构建缺失032毒力基因的猪痘病毒SPV△032.检测SPV△032在不同种属来源细胞系中的培养滴度,并通过动物试验来检测其毒力.结果:猪痘病毒SPV△032株与野生NT1501株在PK15和ST等猪源细胞中的培养滴度差异不显著,均可达到5.0×106 TCID50左右.猪痘病毒SPV△032株在Vero、MDBK等其他物种来源的细胞系中不能进行复制,连续传代2～3代以后,细胞培养物中检测不到猪痘病毒基因,与野生NT1501株培养结果一致.动物试验结果表明,用高浓度SPV△032接种实验猪,接种部位皮肤未出现任何症状,比野生NT1501株的毒力显著降低.接种SPV△032实验猪的细胞免疫和体液免疫反应水平均显著高于野生NT1501株(P＜0.05).接种SPV△032的实验猪不会通过粪便等途径向环境中排毒.结论:本研究构建了032基因缺失猪痘病毒SPV△032,该病毒的毒力与野生NT1501株相比显著下降,可以作为弱毒猪痘病毒载体,用于兽用疫苗研发.