树蛙抗菌肽Cathelicidin在毕赤酵母中的表达及抑菌活性分析

摘要

树蛙(Rhacophorus)抗菌肽Cathelicidin是一类具有广谱抗微生物活性的小分子多肽,在医疗、畜牧等方面有潜在应用价值,但其真核表达少有报道.本研究根据毕赤酵母(Pichia pastoris)的密码子偏爱性进行优化,合成树蛙抗菌肽Cathelicidin的目的基因,与表达载体pPIC9K连接后电击转化至毕赤酵母GS115,通过高浓度G418筛选高拷贝酵母转化子,通过PCR和反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)验证,获得的阳性转化子使用1％甲醇诱导表达72 h后,收集培养液上清液进行体外抑菌活性检测及毒性分析.结果表明,树蛙抗菌肽Cathelicidin在毕赤酵母GS115中获得成功表达,分泌表达的抗菌肽对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherchia coli)具有抑菌活性,最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)分别为(1.175±0.002)和(2.35±0.001)μg/mL,最小抑菌浓度下没有细胞溶血性.本研究为新型树蛙抗菌肽的工业生产提供基础数据支持.