弗氏中华根瘤菌基因文库的构建及与耐盐有关DNA片段的分离

摘要

以耐盐的弗氏中华根瘤菌ＲＴ１９菌株为材料，制备其总ＤＮＡ，经过限制性内切酶ＥｃｏＲＩ的部分酶解，利用电洗脱方法回收得到１５￣２５ｋｂ大小的ＤＮＡ片段。用ＱＩＡＧＥＮ－ｔｉｐ１００试剂盒方法，提取并纯化质粒ｐＬＡＦＲＩ，用ＥｃｏＲＩ将其切成线状。然后用Ｔ４ＤＮＡ连接酶将回收片段与线性载体连接，并利用包装蛋白进行包装，感染大肠杆菌ＳＰ１７．１，构建了ＲＴ１９的基因文库。以固体亚硝基胍作为诱变剂，在０．