美洲商陆抗病毒蛋白真核表达载体的构建及在毕赤酵母中的表达

摘要

从美洲商陆(Phytolacca americana)叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了总RNA,经RT-PCR扩增出缺失突变型抗病毒蛋白PAP基因,将该基因克隆于分泌型真核表达载体pPIC9K,然后导入毕赤酵母(Pachiapastoris)菌株GS115细胞.在甲醇的诱导下,经过酵母高密度发酵进行PAP的表达,经SDS-PAGE分析.结果表明,在培养基上清液中含有一明显的特异性蛋白条带,大小为34 kD,经Western-blotting分析,该蛋白与法国PAP抗血清有特异性反应,体外活性检测表明该蛋白对病毒的侵染性具有高度的抑制性,表明该基因在毕赤酵母GS115中得到了表达.