水稻巯基蛋白酶抑制剂基因(OCI)转化甘薯获得转基因植株

摘要

用根癌农杆菌(Agrobacterium turmefaciens)介导法将水稻巯基蛋白酶抑制剂基因(OCI)导入甘薯(Ipomoea batatas)品种栗子香,获得了转基因植株.所用菌株为根癌农杆菌LBA4404,其携带的pBinh质粒上含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ(NPTⅡ)基因和OCI基因.将继代培养3 d后的栗子香胚性悬浮细胞与LBA4404(OD600nm=0.5)共培养4 d.将共培养后的胚性悬浮细胞首先在含有2mg/L2,4-D和300mg/L Carb(carbencillin)、但不含有Kan(kanamycin)的MS液体培养基中培养5 d,然后在含有2 mg/L2,4-D、50mg/LKan和300mg/L Carb的MS液体培养基中进行选择培养.选择培养4周后,将直径约1mm的抗Kan细胞团转移到添加2mg/L2,-D、50mg/LKan和300mg/LCarb的MS固体培养基上,共转移200个细胞团,诱导得到了8个胚性愈伤组织.将这些抗Kan胚性愈伤组织转移到添加l mg/LABA、50 mg/LKan和100 mg/LCarb的MS固体培养基上,通过体细胞胚胎发生途径获得了1 3株再生植株.PCR和PCR-Southern检测结果表明,获得的13株再生植株中7株是转基因植株.