半定量RT-PCR法评定不同生长阶段猪抗菌肽pr-39基因表达差异

摘要

根据已报道的猪抗菌肽pr-39基因和看家基因β*肌动蛋白(β-actin)基因序列,分别设计pr-39和β-actin的引物,探讨了 PCR体系中适宜的MgCl2浓度、循环次数,以及2对引物间竞争情况.实验揭示,要保证半定量RT-PCR的可行性与可靠性,适宜的MgCl2浓度为2.5 mmol/L,循环次数为29;由于2对引物之间的杂交配对,两对引物需分别进行扩增.根据以上信息构建一优化的半定量RT-PCR法,以β-actin为内标,研究不同生长阶段猪抗菌肽pr-39基因表达的差异.结果显示,不同生长阶段猪pr-39基因表达有差异,从出生到断奶前pr-39表达量呈增加趋势,断奶时表达量下降,断奶后随日龄增加pr-39表达量再逐渐增加.