海洋双RNA病毒(MABV)vp2e和vp3基因在昆虫细胞中的高效表达

摘要

海洋双RNA病毒(Marine bimavirus,MABV)可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症.利用RT-PCR技术得到了MABV Y-6株系A片段的cDNA,进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642 bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列.通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中对VP2e和VP3进行了表达.SDS-PAGE检测和薄层扫描表明,VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8%和8.2%.用HisTag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Western blot检测,结果表明表达产物具有很好的抗原性.同样,用His Tag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Western blot检测,证明融合蛋白表达正确,并且表达产物可溶,易于纯化.实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础.