Oenococcus oenj苹果酸-乳酸发酵关键酶基因在酿酒酵母中的转化与表达

摘要

利用西北农林科技大学葡萄酒学院筛选出的酒酒球菌(Oenococcus oeni)优良菌系SD-2a的包含苹果酸-乳酸酶基因(mleA)和苹果酸通透酶基因(mleP)约2.6 kb的基因片段,并以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以酵母-大肠杆菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒pYELmleAP,转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58,筛选获得酵母转化子YS58/pYELmleAP.斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中,SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了苹果酸-乳酸酶的目的蛋白.对酵母转化子培养上清进行HPLC检测,采用t检验差异显著性分析,结果表明mleA基因在受体菌中进行了功能性表达.获得的酵母转化子在添加L-苹果酸的SD/-Ura培养基中培养4 d,培养液中的L-苹果酸含量降低,培养液上清中L-苹果酸的剩余含量比空载体转化子极显著降低,苹果酸降低19.33%～19.42%.对照未检出乳酸的生成,供试的转化子L-乳酸生成量为1249～1368 mg/L,与对照差异显著.