H5N1亚型禽流感病毒血凝素在昆虫杆状病毒系统中表达与活性鉴定

摘要

从质粒pGEM-HA中扩增H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,构建转移载体pFastBacHT-HA并与大肠杆菌(Escherichia coli)DH10Bac中的Bacmid质粒重组,构建重组转座质粒rBacmid-HA.在脂质体介导下将rBacmid-HA转染sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.在sf9昆虫细胞中表达HA蛋白,通过SDS-PAGE、Western blot和血细胞吸附试验鉴定重组蛋白.结果显示,重组HA蛋白分子量约为66 kD,该蛋白与AIV H5亚型鸡血清发生特异性反应,与H7和H9亚型鸡血清不反应,转染重组杆状病毒后的细胞能吸附鸡的红血球,证明HA基因在sf9昆虫细胞中获得了正确表达,不仅具有亚型特异性,而且有良好的生物反应性.