山羊角膜内皮细胞分离培养与鉴定

摘要

比较山羊眼角膜内皮细胞(GCEC)的4种原代分离培养方法,并对分离培养的角膜内皮细胞(CEC)进行鉴定和研究其生长特性.取屠宰1～24月龄关中奶山羊(Caprar hircus)眼角膜,无菌分离角膜内皮层和Descemet's membrane,分别用组织块法、胰蛋白酶法、dispase酶法和dispase酶联合胰蛋白酶法分离培养原代CEC,比较经4种方法处理后的细胞离散和贴壁情况,筛选出GCEC最佳培养方法,并纯化该方法培养的CEC,对纯化的细胞进行鉴定和研究其生长特性.结果显示,dispase酶联合胰蛋白酶法为最佳分离纯化角膜内皮细胞的方法.分离纯化的细胞经形态学观察、免疫组化染色、Giemsa染色、扫描电镜和透射电镜鉴定为角膜内皮细胞.说明dispase酶联合胰蛋白酶法为角膜内皮细胞分离培养的理想方法,该方法可为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究和构建组织工程化人工角膜内皮提供种子细胞.