肺结核患者外周血白细胞中结核分支杆菌DNA检测及临床意义

摘要

聚合酶链反应（PCR）技术用于病源微生物诊断为临床提供了特异、敏感、快速的实验室诊断方法。为此，我们对肺结核患者外周血白细胞进行结核菌DNA扩增，旨在探索一新的结核菌检测方法及其临床应用价值。资料和方法一、资料所有的病例均为本院的住院病人，26例肺结核患者系临床表现、X线胸片，痰涂片抗酸染色、结核菌培养及临床诊断性治疗确诊的病人。其中有低热、盗汗等结核中毒症状者50例，痰中带血16例，咳嗽63例，胸痛17例。42例非结核病组包括肺癌。慢支、支气管哮喘、支气管内膜炎及胸膜间皮瘤等无临床证据支持的患者。试剂来源：结核分支杆菌PCR试剂由厦门长城生物工程有限公司提供。二、方法1．标本采集和预处理：取患者治疗前构橼酸钠或肝素抗凝外周血2ml，待红细胞自然沉降后取出含有白细胞的血浆0．5ml，离心5分钟，弃血浆，加注射用水0．5ml，溶解红细胞后再离心5分钟，弃上清、下层白细胞沉淀，－20C保存备用。2．扩增与检测：在含沉淀的备用管中加入50yi样品处理液混悬，gOC加热IO分钟，离心5分钟。取上清8VI加入盛有扩增反应体系的扩增管中混匀，离心10秒钟置PE96OO基因扩增仪内扩增。扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳，紫外检...