杯状病毒基因组全长cDNA克隆的构建及感染性病毒RNA的体外转录

摘要

目的：构建猫环状病毒（ＦＣＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆，体外转录感染性病毒ＲＮＡ作为研究人及其他杯状病毒的模型或载体。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增覆盖ＦＣＶ全基因组的３个首尾重叠的片段，分步插入到表达性载体中，构建全程ｃＤＮＡ克隆，体外转录ＲＮＡ〉并转染ＣｒａｎｄｅｌｌＲｅｅｓｅ猫肾（ＣＲＦＫ）细胞。结果：构输长ｃＤＮＡ克隆，体外转录并转染ＣＲＦＫ细胞成功，培养上清对ＣＲＦＫ细胞有感染性，使其出现病变