四倍体菘蓝ISSR-PCR反应体系优化与遗传差异分析

摘要

@@%采用单因子试验,研究引物、dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶及退火温度对PCR扩增的影响,用其建立优化四倍体菘蓝的ISSR-PCR反应体系,分析不同四倍体菘蓝株系的遗传差异性.结果发现ISSR-PCR最佳反应体系为:在25 μL的反应体系中,引物浓度为0.76 μmol/L,dNTPs浓度为190 μmol/L,MgCl2浓度为200 μmol/L,Taq DNA 聚合酶用量为1.5U,模板DNA浓度为20 ng/μL;确定了不同引物最佳退火温度；菘蓝株系间具有中等偏高的遗传差异性,多态性条带达58.22％.表明采用单因子试验可以快速建立ISSR-PCR反应体系,可用于菘蓝遗传差异性分析.