嗜热厌氧乙醇杆菌α-葡萄糖苷酶基因的表达及酶学性质的研究

摘要

用PCR方法从嗜热厌氧乙醇杆菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200中扩增出编码α-葡萄糖苷酶的基因,将其克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pTrc99A上并获得表达α-葡萄糖苷酶的大肠杆菌重组菌.重组菌经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测出蛋白相对分子量约89 kDa,经阴离子交换层析和凝胶层析纯化后的α-葡萄糖苷酶最适反应温度为70 ℃,最适反应pH为5～5.5,且在pH 5.5～6.5之间有较高的稳定性.重组α-葡萄糖苷酶在70 ℃下105 min后酶活仍达到80%.