响应面法优化茯苓多糖硫酸酯化合成工艺及其抗凝血活性分析

摘要

以中药茯苓(Poria cocos)为原料提取茯苓多糖,以氨基磺酸为酯化试剂对茯苓多糖进行硫酸酯化结构改性,制备硫酸酯化茯苓多糖(SP),在单因素试验基础上,应用响应面法试验优化其制备条件.对获得的SP进行纯化、结构表征,通过小白鼠体内抗凝血试验考察SP的抗凝血活性.结果表明,最佳的硫酸酯化工艺条件为反应温度85℃、反应时间4.0 h、氨基磺酸:多糖质量比为3.77∶1,在此条件下,硫酸基团取代度(DS)为1.041,与氯磺酸吡啶法相比取代度相当.精制后SP的红外图谱表明,SP具有多糖及硫酸根基团的特征吸收峰;紫外光谱扫描表明SP无核酸、蛋白质等杂质,纯度较高,且有硫酸根基团的特征吸收,硫酸酯化成功.茯苓多糖经硫酸酯化结构改性后表现出良好的抗凝血活性,其出血时间、全凝血时间、全凝血时间延长率均明显提高;SP对凝血酶的抑制作用与其浓度呈正相互作用,随着SP腹腔注射给药剂量增大,其全凝血时间、延长率均明显提高.