幽门螺杆菌1pp20基因在大肠杆菌TB1中诱导表达方法的研究

摘要

目的: 研究影响幽门螺杆菌lpp20基因在大肠杆菌TB1中表达的因素,探索高效表达的条件,为幽门螺杆菌疫苗抗原的纯化和生产奠定基础.方法: 用PCR方法从幽门螺杆菌的染色体DNA上扩增出lpp20基因片段,将目的基因插入的表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化大肠杆菌(E.coli TB1).采用不同的诱导时间、IPTG浓度和诱导温度进行诱导表达,应用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析.结果: 在诱导1～4 h之间,融合蛋白的表达量变化较为显著,而4～8 h之间则无显著变化;IPTG终浓度低于0.2 mmol/L或高于3.2 mmol/L均能显著减少融合蛋白的表达量(P<0.05),而IPTG终浓度在0.4～2.4 mmol/L之间时,对融合蛋白的表达量并无显著影响;诱导温度在30 ℃～40 ℃之间变化对融合蛋白的表达量无显著影响,超出此范围可使表达量显著减少(P<0.05);在优化诱导条件后,融合蛋白的表达量可达全菌总蛋白的34%.结论: 通过调整诱导时间、IPTG浓度和诱导温度,lpp20基因与载体pMAL-c2X的重组质粒在E.coli TB1中能够高效表达.