哺乳动物胚胎超低温冷冻保存的研究进展

摘要

@@哺乳动物胚胎超低温保存最早在小鼠获得成功。继之，牛、兔、绵羊、大鼠、山羊、猪、人等的胚胎冷冻保存成功并取得了很大进展［1～4］。rn　　1949年Polge冷冻哺乳动物精子获得成功，发现了甘油在精子冷冻过程中能起到保护作用［5］。1972年，英国学者Whittingham首先成功地冷冻保存了小鼠胚胎，发明了胚胎的慢速冷冻保存方法，这项技术一直被广泛应用［6］。1973年Wilmut和Rouso以甘油为防冻剂保存牛胚胎成功［5］。1985年Rall和Fahy又发明了胚胎的玻璃化冷冻保存技术，该技术的开发，简化了操作程序，大大缩短了操作时间，逐步替代了传统的慢速冷冻法［7］。以后经过Scheffen、Kasai、朱士恩等的努力，使该方法得到进一步发展。rnrn1　超低温冷冻保存方法rn1.1　慢速冷冻、慢速解冻法rn　　这是最早建立起来的一种哺乳动物胚胎冷冻方法，以低于1℃/min的速度降低到-40℃或-70℃(小鼠)、-60℃～-120℃(牛)、-80℃(卵母细胞)，再投入液氮，解冻速度也不超过25℃/min。该法的优点是脱水完全，细胞内不易形态冰晶，但比较费时，冷冻保护剂对胚胎作用时间较长［8］。