miR-93-5p靶向DUSP8基因对糖尿病肾病足细胞损伤的影响

摘要

目的:观察miR-93-5p、双特异性磷酸酶8(Dual specificity phosphatase 8,DUSP8)对高糖诱导的人肾小球足细胞(HPC)损伤的影响,并探究其机制。方法:25mM高糖处理HPC细胞6、12、24 h,检测细胞的炎性因子白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)的分泌,细胞凋亡率及凋亡相关蛋白分裂的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein,Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)的表达,筛选最适处理时间12h。将miR-con组(转染miR-con)、miR-93-5p组(转染miR-93-5p mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-93-5p组(转染anti-miR-93-5p mimics)、高糖(HG)+si-con组(转染si-con)、HG+si-DUSP8组(转染si-DUSP8)、HG+miR-93-5p+pcDNA组(共转染miR-93-5p mimics和pcDNA)、HG+miR-93-5p+pcDNA-DUSP8组(共转染miR-93-5p mimics和pcDNA-DUSP8)用脂质体法转染至HPC细胞或高糖处理12 h的HPC细胞。分别使荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)实验、免疫印迹(Western blotting,WB)实验、酶联免疫吸附(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)实验、流式细胞术检测细胞miR-93-5p、DUSP8的表达、IL-6、TNF-α的分泌、DUSP8、Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2的蛋白表达、细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测细胞的荧光活性。结果:与低糖(NG)组相比,HG(6、12、24h)组细胞miR-93-5p的表达显著降低,DUSP8表达显著升高,IL-6、TNF-α的含量显著升高,Cleaved caspase-3、Bcl-2的蛋白表达均显著降低,Bax的蛋白表达显著升高,细胞凋亡率显著升高,最适处理时间为12 h。过表达miR-93-5p抑制高糖诱导的HPC细胞IL-6、TNF-α分泌和凋亡率,并促进Cleaved caspase-3、Bcl-2蛋白,抑制Bax蛋白。miR-93-5p抑制野生型DUSP8细胞的荧光活性。沉默DUSP8具有与过表达miR-93-5p类似的保护足细胞损伤作用,过表达DUSP8则逆转过表达miR-93-5p对损伤足细胞IL-6、TNF-α分泌和凋亡的抑制作用。结论:miR-93-5p抑制高糖诱导足细胞炎性因子的分泌和凋亡,其机制与miR-93-5p靶向DUSP8相关。