广西凡纳滨对虾源副溶血弧菌3种毒力基因检测及tlh基因的蛋白表达

摘要

采用PCR技术检测分离自广西钦州、北海和防城港3市凡纳滨对虾样品中的67株副溶血弧菌(Vib-rio parahaemolyticus)3种毒力基因 tdh、trh和tlh的携带情况,并将 tlh基因进行原核表达,SDS -PAGE和Western blotting鉴定分析.结果显示,67株副溶血弧菌均未扩增出 tdh和 trh基因,而 tlh基因检出率为100 .0%,所检副溶血弧菌的毒力基因型为 tdh- trh- tlh+.成功构建了原核表达质粒pET -28a-tlh ,将其转化至大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导表达,SDS -PAGE电泳检测得到大小约为53 kDa的产物,与预测值相符.经Western blotting鉴定,该重组表达产物能与抗6× His标签的单克隆抗体发生特异性反应.