人羊膜间充质细胞诱导成骨及与胶原-明胶海绵载体复合的实验研究

摘要

目的 通过体外诱导的方法促使人羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cells,hAMCs)成骨分化,并借用胶原 明胶海绵为载体进行复合培养,观察成骨分化后的hAMCs与胶原 明胶海绵载体的复合情况,旨在寻找修复牙槽突裂的种子细胞.方法 结合使用机械法和酶分离法从人羊膜组织中分离hAMCs,将其培养至第三代后利用流式细胞术分选和免疫组织化学的方法进行表型鉴定;加入成骨诱导剂诱导第三代hAMCs,采用茜素红染色检测钙盐沉积的方法判定其成骨分化的程度;将第三代hAMCs消化后接种于胶原 明胶海绵载体上复合培养,观察细胞与胶原 明胶海绵载体复合后的生长情况.结果 流式细胞术分选结果显示第三代hAMCs高表达CD29、CD166、CD44、CD73,但不表达CD34、CD45;免疫组织化学结果显示hAMCs波形蛋白染色阳性;茜素红染色结果显示经成骨诱导21d后可在hAMCs中检测到染色阳性的钙结节;倒置相差显微镜观察显示hAMCs与胶原 明胶海绵在载体复合培养72 h后能形成良好的粘附生长.结论 本实验成功从人羊膜组织中分离hAMCs,且培养至第三代的hAMCs符合实验标准,同时成功构建了hAMCs诱导成骨分化模型.此外,胶原 明胶海绵可作为与hAMCs进行复合培养的良好载体,为后续进行动物体内实验提供前期体外实验基础.