血清中HBV cccDNA定量检测方法的建立及临床应用

摘要

目的 建立一种以TaqMan为探针检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(cccDNA)的实时定量PCR检测方法.方法 根据rcDNA与cccDNA结构差异,在缺口两侧设计引物,应用TaqMan探针分析,对实时PCR产物进行克隆、测序以证实产物为目的 片段;同时对89例符合病毒性乙型肝炎诊断标准的血清样本进行HBV cccDNA和HBV DNA含量检测,3例未感染乙肝病毒的血清作为阴性对照.结果测序结果显示扩增产物为目的 片段,检出下限为500 copies/mL;89例样本检测HBV cccDNA的阳性率为55.0%,HBeAg阳性患者阳性率为67.8%,HBeAb阳性患者阳性率为30.0%,HBeAg阳性的样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb阳性的样本(P<0.05),阴性对照组未检测出HBV cccDNA.应用ROC曲线图评价HBV cccDNA在抗病毒治疗中的价值,其价值为0.927.结论以TaqMan为探针检测血清HBV cccDNA的实时PCR检测方法,具有快速、敏感、特异性高等特点,应用该方法检测HBV cccDNA含量可作为判断临床抗病毒治疗效果的重要参考指标,指导临床用药.