乙醇脱氢核酶ribox02与NAD+/NADH结合位点的探测

摘要

目的 探讨乙醇脱氢核酶ribox02与NAD+、NADH特异性结合的位点以及结合力性质.方法 通过选择性2-OH酰基化学探测法(selective 2-hydroxyl acylation analyzed by primer extension,SHAPE)探测ribox02的二级结构;利用等温滴定量热法(isothermal titratio calorimetry,ITC)进一步测定ribox02与NADH、NAD+的亲和力强度及作用力性质;通过紫外交联法精确定位NAD+、NADH与ribox02 RNA的特异性结合位点.结果 直接解析ribox02的二级结构,并发现核酶ribox02与NADH、NAD+的相互作用力为范德华力或氢键作用,且ribox02与NADH的相互作用力较之与NAD+更为强烈,ribox02与NADH、NAD+的特异性结合位点为23G、24U、25U、38U、72U、73U、74U、75G和95G.结论 通过ribox02的二级结构及其与NAD+、NADH的相互作用揭示了核酶ribox02与NAD+/NADH特异性结合位点以及结合力性质.