SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测脑胶质瘤中RASSF1A mRNA

摘要

目的建立检测RASSF1A(RAS association domain family 1A RASSF1A)mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR的方法,了解脑胶质瘤中RASSF1A的表达水平,研究RASSF1A mRNA的表达和肿瘤恶性程度的关系.方法构建克隆载体作为定量模板,Roche LightCycler(R)定量检测48例不同恶性程度胶质瘤组织和6例正常脑组织标本.结果48例脑胶质瘤组织中有5例未检出RASSF1A mRNA.与内参照三磷酸甘油醛脱氢酶基因GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)比较后,RASSF1A mRNA的表达范围从0.08～1.00/μg,均值为(0.50±0.004)/μg.6例正常脑组织标本均有RASSF1A mRNA的表达,范围从0.70～1.80/μg,均值为(1.05±0.08)/μg.各期胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织,但胶质瘤不同病理级别组之间的差异无显著意义.结论胶质瘤中RASSF1A的mRNA的表达水平均低于正常脑组织.成功地建立了SYBR Green Ⅰ实时定量检测RASSF1A基因表达方法,为研究RASSF1A表达水平下调的机制、表达水平和肿瘤的恶性程度、转移、预后等的关系打下基础.