组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力影响的初步研究

摘要

目的 初步研究福氏志贺菌组氨酸蛋白激酶EnvZ抑制剂对福氏志贺菌毒力的影响.方法 通过构建志贺菌EnvZ胞内段(SF-EnvZc)蛋白的原核表达质粒,表达并纯化SF-EnvZc蛋白,在SPECS公司的小分子化合物库中模拟筛选出的10个候选EnvZ抑制剂的基础上,通过体外磷酸化的方法筛选出能够有效地抑制SF-EnvZc蛋白磷酸化的小分子化合物(EnvZ抑制剂),然后采用表面等离子共振(SPR)技术检测EnvZ抑制剂与SF-EnvZc蛋白的结合力,并采用小鼠角结膜志贺菌感染模型检测EnvZ抑制剂对福氏志贺菌株Sf9380毒力的影响.结果 在10个候选EnvZ抑制剂中,化合物1、2、3能够有效地抑制SF-EnvZc蛋白的磷酸化,其IC50值分别为(70.17±5.83)、(10.18±0.86)和(37.66±9.64)μmol/L,且上述3个化合物表现出对SF-EnvZc蛋白的高亲和力,其平衡解离常数(Kd)分别为4.08、3.57和2.94 μmol/L,其中化合物1和2能够明显抑制福氏志贺菌株Sf9380导致的小鼠角结膜炎症反应(由+++变为-),化合物3能够明显降低其炎症反应(由+++降为+),化合物1、2、3的最小有效浓度分别为12.5、12.5和100μmol/L.结论 筛选出3个EnvZ抑制剂,化合物1、2、3能够不同程度地抑制或降低福氏志贺菌导致的小鼠角结膜炎症反应,提示EnvZ抑制剂能够降低福氏志贺菌的毒力.