双水相法制备鳜鱼(Siniperca chuatsi)肌动蛋白及定量分析

摘要

以鳜鱼肌原纤维蛋白为研究对象,通过高分子与低分子醇-盐双水相体系成相能力分析,建立双水相分离纯化鳜鱼肌动蛋白的方法,基于高效毛细管胶束电动色谱(micellar electrokinetic capillary chromatography,MECC)耦合二极管阵列检测器(diode array detector,DAD)探索MECC-DAD法定量检测鳜鱼肌动蛋白的新方法.结果表明,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度鉴定和肌动蛋白提取率计算确定异丙醇-硫酸铵双水相体系为最佳分离体系,在单因素试验的基础上,利用响应面法分析确定了双水相提取鳜鱼肌动蛋白的最佳工艺条件:当异丙醇质量分数26％、硫酸铵质量分数11％、pH 9.0时,鳜鱼样品肌动蛋白提取率为11.04％,与模型预测值接近.MECC-DAD分析结果显示,肌动蛋白的定量出峰时间约为10 min,毛细管电泳图谱基线平稳无杂峰.本实验为名贵鱼类质量品质属性的鉴定及鱼类肌动蛋白标准品的研制奠定基础,为鱼类蛋白功能开发利用及快速定量检测提供理论依据.